(Flow cytometry, FCM) on soluanalysaattori, joka mittaa värjäytyneiden solumarkkerien fluoresenssin intensiteettiä. Se on korkean teknologian teknologia, joka on kehitetty yksittäisten solujen analysointiin ja lajitteluun perustuen. Se voi nopeasti mitata ja luokitella solujen koon, sisäisen rakenteen, DNA:n, RNA:n, proteiinit, antigeenit ja muut fysikaaliset tai kemialliset ominaisuudet, ja se voi perustua näiden luokittelujen kokoelmaan.
Virtaussytometri koostuu pääasiassa seuraavista viidestä osasta:
1 Virtauskammio ja nestejärjestelmä
2 Laservalonlähde ja säteen muotoilujärjestelmä
3 Optinen järjestelmä
4 Elektroniikka, tallennus-, näyttö- ja analyysijärjestelmä
5 Solujen lajittelujärjestelmä
Niistä laserviritys laservalonlähteessä ja säteenmuodostusjärjestelmässä on tärkein fluoresenssisignaalien mittaus virtaussytometriassa. Viritysvalon intensiteetti ja valotusaika liittyvät fluoresenssisignaalin voimakkuuteen. Laser on koherentti valonlähde, joka voi tarjota yhden aallonpituuden, korkean intensiteetin ja erittäin vakaan valaistuksen. Se on ihanteellinen viritysvalonlähde näiden vaatimusten täyttämiseen.
Laserlähteen ja virtauskammion välissä on kaksi sylinterimäistä linssiä. Nämä linssit tarkentavat laserlähteestä tulevan pyöreän poikkileikkauksen omaavan lasersäteen elliptiseksi säteeksi, jonka poikkileikkaus on pienempi (22 μm × 66 μm). Tämän elliptisen säteen sisällä oleva laserenergia jakautuu normaalijakauman mukaan, mikä varmistaa tasaisen valaistuksen voimakkuuden lasertunnistusalueen läpi kulkeville soluille. Toisaalta optinen järjestelmä koostuu useista sarjoista linssejä, reikiä ja suodattimia, jotka voidaan karkeasti jakaa kahteen ryhmään: virtauskammion ylä- ja alavirtaan.
Virtauskammion edessä oleva optinen järjestelmä koostuu linssistä ja neulanreiästä. Linssin ja neulanreiän (yleensä kaksi linssiä ja neulanreikä) päätehtävä on kohdistaa laserlähteen lähettämä pyöreän poikkileikkauksen omaava lasersäde poikkileikkaukseltaan pienemmäksi elliptiseksi säteeksi. Tämä jakaa laserenergian normaalijakauman mukaan, mikä varmistaa soluille tasaisen valaistuksen voimakkuuden lasertunnistusalueella ja minimoi hajavalon aiheuttamat häiriöt.
Suodattimia on kolme päätyyppiä:
1: Long Pass Filter (LPF) - päästää läpi vain valon, jonka aallonpituudet ovat tiettyä arvoa korkeammat.
2: Short-pass filter (SPF) - päästää läpi vain valon, jonka aallonpituus on alle tietyn arvon.
3: Kaistanpäästösuodatin (BPF) - sallii vain tietyn aallonpituusalueen valon kulkemisen.
Erilaiset suodattimien yhdistelmät voivat ohjata fluoresenssisignaaleja eri aallonpituuksilla yksittäisiin fotomonistinputkiin (PMT). Esimerkiksi suodattimet vihreän fluoresenssin (FITC) havaitsemiseksi PMT:n edessä ovat LPF550 ja BPF525. Oranssinpunaisen fluoresenssin (PE) havaitsemiseen PMT:n edessä käytetyt suodattimet ovat LPF600 ja BPF575. Suodattimet punaisen fluoresenssin (CY5) havaitsemiseksi PMT:n edessä ovat LPF650 ja BPF675.
Virtaussytometriaa käytetään pääasiassa solujen lajitteluun. Tietotekniikan kehittymisen, immunologian kehityksen ja monoklonaalisen vasta-aineteknologian keksimisen myötä sen sovellukset biologiassa, lääketieteessä, farmasian ja muilla aloilla ovat yleistymässä. Näitä sovelluksia ovat soludynamiikan analyysi, soluapoptoosi, solutyypitys, kasvaindiagnoosi, lääkkeiden tehokkuusanalyysi jne.
Postitusaika: 21.9.2023
