(Virtaussytometria, FCM) on soluanalysaattori, joka mittaa värjättyjen solimarkkerien fluoresenssin voimakkuutta. Se on korkean teknologian tekniikka, joka on kehitetty yksittäisten solujen analysoinnin ja lajittelun perusteella. Se voi nopeasti mitata ja luokitella solujen koon, sisäisen rakenteen, DNA: n, RNA: n, proteiinien, antigeenien ja muiden fysikaalisten tai kemiallisten ominaisuuksien ja voi perustua näiden luokittelujen keräämiseen.
Virtaussytometri koostuu pääasiassa seuraavista viidestä osasta:
1 virtauskammio ja nestemäinen järjestelmä
2 laservalonlähde ja palkin muotoilujärjestelmä
3 optinen järjestelmä
4 elektroniikka-, tallennus-, näyttö- ja analysointijärjestelmä
5 Solujen lajittelujärjestelmä
Niistä laservalonlähteen ja säteen muodostamisjärjestelmän laservirhe on fluoresenssisignaalien päämittaus virtaussytometriassa. Virhevalon voimakkuus ja valotusaika liittyvät fluoresenssisignaalin voimakkuuteen. Laser on koherentti valonlähde, joka voi tarjota yhden aallonpituuden, korkean intensiteetin ja korkean vakauden valaistuksen. Se on ihanteellinen viritysvalonlähde näiden vaatimusten täyttämiseksi.
Laserlähteen ja virtauskammion välillä on kaksi lieriömäistä linssiä. Nämä linssit keskittyvät lasersäteen, jonka ympyrä poikkileikkaus on poistettu laserlähteestä elliptiseen säteen pienemmällä poikkileikkauksella (22 μm × 66 μm). Tämän elliptisen säteen laserenergia jakautuu normaalin jakautumisen mukaan, mikä varmistaa johdonmukaisen valaistuksen voimakkuuden soluille, jotka kulkevat laserin havaitsemisalueen läpi. Toisaalta optinen järjestelmä koostuu useista linsseistä, nastareiästä ja suodattimista, jotka voidaan jakaa karkeasti kahteen ryhmään: virtauskammion ylä- ja alavirtaan.
Virtauskammion edessä oleva optinen järjestelmä koostuu linssistä ja reikästä. Linssin ja reikän (yleensä kaksi linssiä ja reikää) päätehtävää on keskittää lasersäde pyöreällä poikkileikkauksella, jonka laserlähde pääsee elliptiseen säteen pienemmällä poikkileikkauksella. Tämä jakaa laserenergian normaalin jakautumisen mukaan, varmistaen solujen johdonmukaisen valaistuksen voimakkuuden laserin havaitsemisalueella ja minimoimalla kulkuvalon häiriöt.
Suodattimia on kolme päätyyppiä:
1: Pitkä pass -suodatin (LPF) - sallii vain valon, jonka aallonpituudet ovat korkeampi kuin tietty arvo läpikäytäväksi.
2: Lyhytpäästösuodatin (SPF) - sallii valon vain aallonpituuksilla tietyn arvon alapuolella läpäistävä.
3: Kaistanpäästösuodatin (BPF) - sallii valon vain tietyllä aallonpituusalueella läpi.
Erilaiset suodattimien yhdistelmät voivat ohjata fluoresenssisignaalit eri aallonpituuksilla yksittäisiin fotomultiplier -putkiin (PMT). Esimerkiksi suodattimet vihreän fluoresenssin (FITC) havaitsemiseksi PMT: n edessä ovat LPF550 ja BPF525. PMT: n edessä oranssinpunaisen fluoresenssin (PE) havaitsemiseksi käytetyt suodattimet ovat LPF600 ja BPF575. Suodattimet punaisen fluoresenssin (Cy5) havaitsemiseksi PMT: n edessä ovat LPF650 ja BPF675.
Virtaussytometriaa käytetään pääasiassa solujen lajitteluun. Tietotekniikan edistymisen myötä immunologian kehittäminen ja monoklonaalisen vasta -ainetekniikan keksinnön myötä sen sovellukset biologiassa, lääketieteessä, apteekissa ja muissa aloissa ovat yhä laajemmin levinnyt. Nämä sovellukset sisältävät solujen dynamiikan analyysin, solujen apoptoosin, solujen tyypin, kasvaimen diagnoosin, lääkkeen tehokkuusanalyysin jne.
Viestin aika: SEP-21-2023
