Virtaussytometria (FCM) on soluanalysaattori, joka mittaa värjättyjen solumerkkiaineiden fluoresenssin intensiteettiä. Se on huipputeknologiaa, joka on kehitetty yksittäisten solujen analysointiin ja lajitteluun perustuen. Se voi nopeasti mitata ja luokitella solujen koon, sisäisen rakenteen, DNA:n, RNA:n, proteiinit, antigeenit ja muut fysikaaliset tai kemialliset ominaisuudet, ja se voi perustua näiden luokitusten keräämiseen.
Virtaussytometri koostuu pääasiassa seuraavista viidestä osasta:
1 Virtauskammio ja fluidijärjestelmä
2 Laservalonlähde ja säteenmuokkausjärjestelmä
3 Optinen järjestelmä
4 Elektroniikka-, tallennus-, näyttö- ja analyysijärjestelmä
5 Solujen lajittelujärjestelmä
Näistä laserviritys laservalonlähteessä ja säteenmuodostusjärjestelmässä on tärkein fluoresenssisignaalien mittausmenetelmä virtaussytometriassa. Viritysvalon intensiteetti ja valotusaika liittyvät fluoresenssisignaalin intensiteettiin. Laser on koherentti valonlähde, joka voi tuottaa yhden aallonpituuden, suuren intensiteetin ja suuren stabiilisuuden valaistusta. Se on ihanteellinen viritysvalonlähde näiden vaatimusten täyttämiseksi.
Laserlähteen ja virtauskammion välissä on kaksi lieriömäistä linssiä. Nämä linssit kohdistavat laserlähteestä lähtevän pyöreän poikkileikkauksen omaavan lasersäteen elliptiseksi säteeksi, jonka poikkileikkaus on pienempi (22 μm × 66 μm). Tämän elliptisen säteen laserenergia jakautuu normaalijakauman mukaisesti, mikä varmistaa tasaisen valaistusvoimakkuuden laserin havaitsemisalueen läpi kulkeville soluille. Toisaalta optinen järjestelmä koostuu useista linssi-, neulanreikä- ja suodattimista, jotka voidaan karkeasti jakaa kahteen ryhmään: virtauskammion ylävirtaan ja alavirtaan.
Virtauskammion edessä oleva optinen järjestelmä koostuu linssistä ja neulanreiästä. Linssin ja neulanreiän (yleensä kaksi linssiä ja yksi neulanreikä) päätehtävänä on kohdistaa laserlähteen lähettämä pyöreän poikkileikkauksen omaava lasersäde pienemmäksi elliptiseksi säteeksi. Tämä jakaa laserenergian normaalijakauman mukaisesti varmistaen tasaisen valaistusvoimakkuuden soluille laserin havaitsemisalueella ja minimoiden hajavalon aiheuttamat häiriöt.
Suodattimia on kolmea päätyyppiä:
1: Pitkäpäästösuodin (LPF) - päästää läpi vain tiettyä arvoa suuremman aallonpituuden omaavaa valoa.
2: Lyhytpäästösuodin (SPF) – päästää läpi vain tietyn arvon alapuolella olevan aallonpituuden omaavan valon.
3: Kaistanpäästösuodatin (BPF) - päästää läpi vain tietyn aallonpituusalueen valoa.
Erilaiset suodatinyhdistelmät voivat ohjata eri aallonpituuksia sisältäviä fluoresenssisignaaleja yksittäisiin valomonistimiin (PMT). Esimerkiksi vihreän fluoresenssin (FITC) havaitsemiseen PMT:n edessä käytettävät suodattimet ovat LPF550 ja BPF525. Oranssinpunaisen fluoresenssin (PE) havaitsemiseen PMT:n edessä käytettävät suodattimet ovat LPF600 ja BPF575. Punaisen fluoresenssin (CY5) havaitsemiseen PMT:n edessä käytettävät suodattimet ovat LPF650 ja BPF675.
Virtaussytometriaa käytetään pääasiassa solujen lajitteluun. Tietokoneteknologian kehittyessä, immunologian kehittyessä ja monoklonaalisten vasta-aineiden teknologian keksimisen myötä sen sovellukset biologiassa, lääketieteessä, farmasiassa ja muilla aloilla ovat yleistymässä. Näitä sovelluksia ovat soludynamiikan analyysi, solujen apoptoosi, solutyypitys, kasvainten diagnosointi, lääkkeiden tehokkuuden analyysi jne.
Julkaisun aika: 21. syyskuuta 2023
